在ELISA试剂盒中通常有三次加样步聚，即加标本，加酶联络物，加底物。冻住血清融解后，蛋白质局部浓缩，散布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下倒置混和，不要在混匀器上强烈振动。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只需待血清天然凝聚、缩短后即可取得。ELISA试剂盒也可在板孔中参与稀释液，然后在微型轰动器上轰动1分钟以保证混和。通常说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超越一星期测定的需低温冰存。

可用作ELISA试剂盒测定的标本十分广泛，体液(如血清 )、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其间某种抗体 或抗原成份，ELISA试剂盒中本次试验不需用的有些应及时放回冰箱保存。在间接法ELISA试剂盒中可使本底加深。

下面将叙说ELISA试剂盒板式ELISA各个操作过程的留神要害，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与格外仪器协作应用，严峻遵从划定操作，必能得出的成果。ELISA试剂盒加样时应将所加物加在ELISA试剂盒板孔的底部，避免加在孔壁上部，并留神
不可溅起，不可产愤慨泡。有此测定(如间接法ELISA)需用稀的血清，可在试管中按划定的稀释度稀释后再加样。

ELISA试剂盒实验中需留心下列的细节：

1. 严格按照规定的时刻和温度进行温育以保证成果。一切试剂都必须在运用前到达室温20-25℃。运用后当即冷藏保存试剂。

2. 洗板不正确能够导致不的成果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔枯燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4. 底物显色液应呈无色或很浅的色彩，现已变蓝的底物液不能运用。

5. 防止试剂和标本的穿插污染以免形成错误成果。

6. 在储存和温育时防止强光直接照射。

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任何反响试剂不能触摸漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会损坏试剂盒中反响试剂的生物活性。

9. 不能运用过期产品。

10. 假如可能传播疾病，一切的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测设备。