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原代细胞的培养方法
时间: 2021-12-07 09:19:22
原代细胞最接近和最能反映体内生长特性,细胞分化等实验研究,细胞的培养,也叫初代培养,是从供体取得组织细胞在体外进行的首次培养,是建立细胞系的第一步,是一项基本技术。

培养方法一般有以下4种:
1组织块培养法
2 消化培养法
3 悬浮细胞培养法
4器官培养

组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中,瓶壁可预先涂以胶原薄层,以利于组织块粘着于瓶壁,使周边细胞能沿瓶壁向外生长。可采用低速离心分离,直接培养,或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响,以及局部环境的生物调节作用。

培养条件:
一、静置贴壁细胞(包括半贴壁细胞的培养)培养

1、细胞要通过充分漂洗,以尽量除去消化液的毒性;

2、细胞接种时浓度要稍大一些,至少为5×108细胞/L;

3、培养基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培养;

4、 胎牛血清浓度为10%-80%;

5、应在37℃5% CO2的培养箱中培养;

6、在起始的2天中尽量减少振荡,以防止刚贴壁的细胞发生脱落,漂浮;

7、基本贴壁伸展并逐渐形成网状,应将原代细胞换液;

二、悬浮细胞培养

1、短期培养,可在含10%小牛血清的RPMI1640培养基中进行;

2、细胞浓度可在5-8×109/L范围内,进行分瓶试验;

3、长期培养时,淋巴细胞中要加入生长因子,要加入少量的原患者血清,以利细胞生长;

4、细胞换液一般每隔3天需半量换液一次;

5、细胞传代一般待细胞增殖加快、细胞密度较高时才能进行。

原代细胞的培养方法

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