产品仅供教研使用,用于定量检测细胞培养上清、血清、血浆中 小鼠BLC1。
简介
B-淋巴细胞趋化因子(BLC)又称CXCL13,是一种蛋白质配体,它是属于CXC趋化因子家族的一种小型趋化因子,如其名称所示,这种趋化因子对属于B-1和B-2亚群的B细胞有选择性的趋化作用,并通过与趋化因子受体CXCR5相互作用而发挥其作用,CXCL13及其受体CXCR5控制淋巴组织滤泡内B细胞的组织,并在肝脏、脾脏、淋巴结和肠道中高度表达,在T淋巴细胞中,它的表达被认为反映了T细胞的生殖中心起源,特别是被称为滤泡B辅助T细胞(或TFH细胞)的T细胞亚组,因此,它在T细胞淋巴瘤中的表达,如血管免疫细胞性T细胞淋巴瘤,被认为反映了肿瘤性T细胞的生殖中心起源。
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物BLC1,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中BLC1的浓度。
8. 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
抗体工作液配置 : 使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置 : 使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备 注:如待测样本中BLC1浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(pg/mL) |
1000 |
500 |
250 |
125 |
62.5 |
31.25 |
15.63 |
0 |
OD值 |
2.443 |
1.79 |
1.061 |
0.636 |
0.479 |
0.284 |
0.194 |
0.08 |
校正OD值 |
2.363 |
1.71 |
0.981 |
0.556 |
0.399 |
0.204 |
0.114 |
0 |
本图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
实验步骤
6. 终止反应:待显色反应结束后,每孔加入50μL终止液,轻轻混匀,5分钟内用预热完成的酶标仪在450nm处测吸光值。
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康 小鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。
线性关系
分别在选取的4份健康 小鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度BLC1,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评估线性。
注意事项
本公司 小鼠ELISA试剂盒检测范围、灵敏度等实验数据,因检测样本的不同会有所调整,实际数据以随货说明书为准。