产品仅供教研使用,用于定量检测细胞培养上清、血清、血浆中 人GAL9。
简介
半乳糖凝集素9(Galectin-9)是1997年首次从大鼠胚胎肾脏中分离出来的一种36kDaβ-半乳糖苷凝集素蛋白,是由LGALS9基因编码的蛋白质,它是半乳糖凝集素家族的成员,具有由肽连接的N-和C-末端碳水化合物结合结构域,它具有重要的细胞质,细胞内功能和控制AMPK以应对暴露于内源性和外源性膜损伤剂,它通过其对AMPK的调节,与基于半乳糖凝集素-8的作用合作,使溶酶体损伤剂和条件的下游mTOR失活,它的表达已在各种血液系统恶性肿瘤中检测到,例如CLL,MDS,霍奇金和非霍奇金淋巴瘤或实体瘤,如肺癌、乳腺癌和肝细胞癌,它通过肿瘤细胞转化,细胞周期调节,血管生成和细胞粘附对肿瘤发生做出了贡献,HAVCR2与它相互作用减弱了T细胞扩增和效应子在肿瘤微环境和慢性感染中的作用。
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物GAL9,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中GAL9的浓度。
8. 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
抗体工作液配置 : 使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置 : 使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备 注:如待测样本中GAL9浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(pg/mL) |
500 |
250 |
125 |
62.5 |
31.25 |
15.63 |
7.82 |
0 |
OD值 |
2.516 |
1.668 |
0.934 |
0.789 |
0.354 |
0.214 |
0.149 |
0.052 |
校正OD值 |
2.464 |
1.616 |
0.882 |
0.737 |
0.302 |
0.162 |
0.097 |
0 |
本图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
实验步骤
6. 终止反应:待显色反应结束后,每孔加入50μL终止液,轻轻混匀,5分钟内用预热完成的酶标仪在450nm处测吸光值。
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康 人血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。
线性关系
分别在选取的4份健康 人血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度GAL9,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评估线性。
注意事项
本公司 人ELISA试剂盒检测范围、灵敏度等实验数据,因检测样本的不同会有所调整,实际数据以随货说明书为准。