产品仅供教研使用,用于定量检测细胞培养上清、血清、血浆中 大鼠TGF-α。
简介
转化生长因子α(TFG-α),由TGFA基因编码的蛋白质。作为表皮生长因子 (EGF) 家族的一员,它是一种促有丝分裂多肽,它可以诱导上皮发育,可以使多种细胞转化,它与表皮生长因子的氨基酸顺序相似,它是由巨噬细胞,脑细胞和表皮细胞产生的,与表皮生长因子类似,它通过与细胞表面的受体表皮生长因子受体结合而起作用,当与能够为细胞信号传递蛋白激酶活性的受体结合时,该蛋白质被激活,它是一种转化生长因子,是表皮生长因子受体的配体,可激活细胞增殖、分化和发育的信号通路,这种蛋白质可以作为跨膜结合配体或可溶性配体,该基因与许多类型的癌症有关,它也可能与某些唇裂/腭裂病例有关,在胃中,它是在正常的胃粘膜内制造的,它已被证明可以抑制胃酸分泌,它可以在巨噬细胞、脑细胞和角质形成细胞中产生,它诱导上皮发育。
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物TGF-α,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中TGF-α的浓度。
8. 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
抗体工作液配置 : 使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置 : 使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备 注:如待测样本中TGF-α浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(pg/mL) |
500 |
250 |
125 |
62.5 |
31.25 |
15.63 |
7.82 |
0 |
OD值 |
2.417 |
1.785 |
0.929 |
0.682 |
0.396 |
0.224 |
0.127 |
0.065 |
校正OD值 |
2.352 |
1.72 |
0.864 |
0.617 |
0.331 |
0.159 |
0.062 |
0 |
本图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
实验步骤
6. 终止反应:待显色反应结束后,每孔加入50μL终止液,轻轻混匀,5分钟内用预热完成的酶标仪在450nm处测吸光值。
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康 大鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。
线性关系
分别在选取的4份健康 大鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度TGF-α,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评估线性。
注意事项
本公司 大鼠ELISA试剂盒检测范围、灵敏度等实验数据,因检测样本的不同会有所调整,实际数据以随货说明书为准。