产品仅供教研使用,用于定量检测细胞培养上清、血清、血浆中 犬TSH。
简介
促甲状腺激素(又称促甲状腺素、促甲状腺激素,或简称TSH)是由垂体前叶的甲状腺细胞产生的一种糖蛋白激素, 可刺激甲状腺产生甲状腺素,然后产生三碘甲状腺原氨酸,刺激体内几乎所有组织的代谢,甲状腺素和三碘甲状腺原氨酸对维持身体的代谢率、心脏和消化功能、肌肉控制、大脑发育和骨骼维护至关重要,当促甲状腺激素与甲状腺细胞上的受体结合时,会使这些细胞产生甲状腺素和三碘甲状腺原氨酸并释放到血液中。
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物TSH,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中TSH的浓度。
8. 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
抗体工作液配置 : 使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置 : 使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备 注:如待测样本中TSH浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(ng/mL) |
16 |
8 |
4 |
2 |
1 |
0.5 |
0.25 |
0 |
OD值 |
2.494 |
1.643 |
1.048 |
0.703 |
0.44 |
0.206 |
0.136 |
0.08 |
校正OD值 |
2.414 |
1.563 |
0.968 |
0.623 |
0.36 |
0.126 |
0.056 |
0 |
本图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
实验步骤
6. 终止反应:待显色反应结束后,每孔加入50μL终止液,轻轻混匀,5分钟内用预热完成的酶标仪在450nm处测吸光值。
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康 犬血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。
线性关系
分别在选取的4份健康 犬血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度TSH,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评估线性。
注意事项
本公司 犬ELISA试剂盒检测范围、灵敏度等实验数据,因检测样本的不同会有所调整,实际数据以随货说明书为准。