异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷简称IPTG,分子式为C9H18O5S,分子量为238.30
CAS号为367-93-1。IPTG是一种作用极强的诱导剂,不易被细菌代谢而且很稳定。基于这个特性,当携带带lacZ 基因载体DNA以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可根据是否呈现蓝/白色菌落(或噬菌斑)判断出基因重组体。此外,它还可以作为具有lac或tac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。
IPTG溶液(20%,0.8mol/L)经过滤除菌,一般工作浓度为1mM,主要用于诱导外源基因的表达,也用于原核表达系统,使其表达量增高,产物稳定,且易鉴定、易纯化。IPTG经常与X-Gal合用,X-Gal的工作浓度一般在5~10μg/ml。
自备材料:
1、 琼脂培养基
2、 氨苄青霉素溶液
3、 培养箱、培养皿
操作步骤:
1、 在琼脂培养基中,加入Amp、IPTG、X-Gal,冷却制成培养基平板,转化、培养。
2、 可根据长出菌体的蓝白色,而方便地挑选出基因重组体(白色为具有DNA插入片段的基因重组体)。
注意事项:
尽量减少反复冻融的次数,以免失效。
注意无菌操作,避免细菌污染。
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