固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构,固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变,从而使酶失活。固定液分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等,较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
动物灌注液可采用多聚甲醛或多聚甲醛与其他的混合物。动物灌注液是由4%多聚甲醛、蔗糖、硫酸镁等组成,该液适合于绝大多数动物灌注和固定。
操作步骤:
1、 用生理盐水清洗,速度要快,一般2~3min。
2、 灌注速度不宜过快,一般至少30min。
3、 灌注完毕立即取出组织,置于适当的固定液中保存。
注意事项:
动物灌注液有一定刺激性和腐蚀性,请在通风环境下小心操作。
一经开启,尽快用完,储存过久的液体效果易下降。
固定液的容量应足够,一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。
温度对固定的影响很明显,提高温度可以加速固定作用,但温度不宜过高。
取出新鲜组织后,应及时固定,无法及时固定时,应保存于生理盐水中及时送检。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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