溴化乙锭(Ethidium Bromide,EB)分子式为C21H20BrN3,分子量为394.31,是一种非常灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA,302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号。溴化乙锭具有一定的毒性,实验结束后应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置,避免污染环境。
自备材料:
1、 电泳缓冲液(如TAE、TBE等)
2、 微波炉
3、 紫外分析仪或凝胶成像系统
操作步骤(仅供参考):
将50ml琼脂糖凝胶溶液(浓度一般为0.8~2%)在微波炉中融化。
加入50~100μl Ethidium Bromide(1mg/ml),轻轻摇匀避免气泡。
冷却至50~60℃不烫手时倒胶,待琼脂糖凝胶完全凝固,拔出梳子并置于电泳缓冲液中,上样电泳。
紫外分析仪或凝胶成像系统下观察并拍照或记录。
注意事项:
凝胶厚度一般不超过0.5cm,凝胶太厚会影响检测的灵敏度。
通过凝胶电泳回收DNA片段时,应避免长时间暴露于紫外线下。
EB有一定毒性,对皮肤、眼睛有一定刺激,请小心操作。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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