将质粒DNA导入细菌细胞是克隆的基础,转化感受态细菌有多种方法,如氯化钙法、电转化法等。一步法感受态细菌制备液属于化学转化法,可以快速的进行制备和转化,转化效率较氯化钙法稍低或相当,经无菌处理,用于质粒DNA导入细胞。
操作步骤(仅供参考):
接种一个单菌落于50ml LB培养基中,37℃中速(200~250r/min)摇床过夜。按1:100的比例将过夜培养的菌液加入到新鲜的LB培养基,继续培养至OD600为0.3~0.4。
加入等体积的预冷的一步法感受态细菌制备液中,冰上温和的混匀。
菌液分成小份,迅速冻存,于-70℃长期保存。进行转化时,冻存菌液应缓慢融化。
迅速融化冻存菌,将100μl感受态细菌和1~5μl DNA(0.1~100ng)加入到预冷的EP管中,4℃放置10~60min。
加入1ml Lea感受态培养液,37℃温和振荡培养30~60min。
凃板于LB平板上,培养,挑取单克隆,鉴定并保存。
注意事项:
注意无菌操作,避免微生物污染。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
|
共有(72)人参考评价
仅对购买过该产品的用户开放!
{comment_time|今天}
{content|默认评论}
{comment_time|今天}
{content|默认好评}
{comment_time|今天}
{content|默认中评}
{comment_time|今天}
{content|默认差评}