电穿孔法适用于多数类型的细胞,即可产生高频率的稳定转染,又可产生瞬时的基因表达,操作简单。植物原生质体细胞可通过电穿孔的方法进行转染。植物电穿孔缓冲液由磷酸盐、甘露醇、氯化钙等组成,用于质粒DNA导入细胞。
操作步骤(仅供参考):
小心切取植物材料,使其达到5mm的条状。植物材料置于原生质体溶液中温育,30℃旋转摇床3~6h,以便获得原生质体细胞。
经80μm尼龙网过滤除去沉渣,流入15ml离心管。用4ml植物电穿孔缓冲液淋洗筛网并收入离心管。
300g 离心5min,弃上清。
用5ml植物电穿孔缓冲液重复洗涤。
计数细胞,按1.5~2×106细胞/ml的密度将原生质体细胞重悬于植物电穿孔缓冲液中。
进行电穿孔转染。
注意事项:
注意无菌操作,避免微生物污染。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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