将质粒DNA导入细菌细胞是克隆的基础,转化感受态细菌有多种方法。采用转化储存液(2×TSS,pH6.5)可以快速的进行制备和转化,但效率较氯化钙法稍低或相当。转化储存液(2×TSS,pH6.5)由PEG、DMSO等组成,经无菌处理,用于质粒DNA导入细胞。
操作步骤(仅供参考):
接种一个单菌落于50ml LB培养基中,37℃中速(200~250r/min)摇床过夜,再取少量上述培养液加入LB培养基继续培养至OD600为0.3~0.4。
加入等体积的预冷的转化储存液(2×TSS,pH6.5)中,冰上温和的混匀。
菌液分成小份,迅速冻存,于-70℃长期保存。
进行转化时,冻存菌液应缓慢融化,并立即使用。
注意事项:
注意无菌操作,避免微生物污染。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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