从植物组织中制备基因组DNA较常采用的方法有氯化离心法、CTAB抽提法等。CTAB抽提法是经典的植物DNA提取法,可以用于多种不同类型植物样品DNA的提取,获得的量很高,但是纯度一般,但是足够用于大多数分子生物学实验。
CTAB抽提液的有效成分为CTAB(十六烷基三乙基溴化铵),临用前加入2-ME,使其更有效,更稳定。
自备材料:
1、 液氮或匀浆器
2、 恒温箱
3、 24:1氯仿/异戊醇
操作步骤(仅供参考):
1、 用液氮或干冰冷却匀浆器/粉碎器,将植物组织粉碎成细粉,将冷冻的组织转移到含有机溶剂的试管或烧杯中。
2、 取适量CTAB抽提液,按CTAB抽提液:2-ME=50:1的比例混匀,预热。
3、 向粉碎后的组织中加入预热的CTAB抽提液(4ml/g),充分混匀,65℃温育10~60min,并不时混匀。
4、 加入等体积24:1氯仿/异戊醇,颠倒充分混匀,4℃ 7500g离心5min,回收上层水相。
注意事项:
如果每次的使用量很小,可以适当分装后再使用。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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