分离纯化完整的RNA对于分子生物学的下游实验极其重要,也是进行基因表达分析的基础。从革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌中提取RNA的方法需要蛋白酶消化和有机溶剂抽提去除蛋白质,核酸消化去除DNA。革兰阳性菌裂解缓冲液主要由Tris-HCl、氯化钠、SDS等组成,临用前加入蛋白酶K至终浓度100μg/ml。
操作步骤(仅供参考):
1、 取适量的革兰阳性菌裂解缓冲液,加入蛋白酶K使其终浓度为100μg/ml,待用。
2、 取10ml培养物,4℃ 12000g离心10min,弃上清。
3、 重悬菌体于0.5ml含有蛋白酶K的革兰阳性菌裂解缓冲液,在干冰或其他低温中冻结。
4、 解冻并超声30W 3次,每次10~15s,37℃温育60min。
5、 进行酚氯仿异戊醇等方法抽提。
注意事项:
如果每次的使用量很小,可以适当分装后再使用。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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