产品名称

哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒

产品编号

JLC－SJ2317

产品有效期

12个月

产品保存条件

RT

产品介绍

用分子生物学技术研究复杂的基因组，首先要求制备纯净的高分子质量DNA，一般分为两个步骤，先裂解细胞、溶解DNA，接着采用酶学或化学方法去除蛋白、RNA以及其他大分子。Leagene哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒(Mammalian genomic DNA extraction kit)采用经典的蛋白酶K处理法，可以抽提到100～150kb以上的基因组DNA，提取的基因组DNA可用于Southern杂交、基因组DNA的PCR扩增及基因组DNA文库的构建等。该试剂盒的提取效率大致为，从1g组织可以提取到约150～200μg 100kb以上的基因组DNA，从106～107Hela细胞可以提取到约5～50μg 100kb以上的基因组DNA。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：

1、 组织或培养细胞

2、 PBS

3、 无水乙醇、70%乙醇

4、 25:24:1酚/氯仿/异戊醇

操作步骤(仅供参考)：

1、 准备样品：

①
组织样本：切下组织并立即剪成小块，置于液氮中冻结。将100mg～1g冻结的组织用预冷的研钵和研杵研碎或用锤子将其捣成碎末。培养细胞：收集贴壁生长或悬浮生长细胞培养液，贴壁生长细胞需先用胰蛋白酶消化液消化，再用PBS清洗一次。4℃离心机，1000～2000g离心1～2min，弃上清。用1～10ml预冷的PBS再次悬浮离心，如此2洗涤次。

2、 每1ml样品裂解液加入5μl的蛋白酶K溶液，混匀。每50mg组织或5×107细胞用0.5～0.6ml样品裂解液悬浮，悬浮应彻底，不应留下结块。

3、 充分混匀，50℃振荡下温育12～18h或过夜。

4、 加入等体积25:24:1酚/氯仿/异戊醇，轻轻混合，尽可能减少对DNA的剪切。

5、 吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积酚/氯仿/异戊醇再抽提一次。重复该步骤1次。

6、 吸取上层液(水溶液)250～300μl至新EP管中，加入等体积无水乙醇和1/4体积的乙酸铵溶液，颠倒混匀数次。

7、 4℃ 10000g 1min，弃上清。

8、 加入70%乙醇，4℃ 10000g 1min，弃上清。重复该步骤一次。

9、 尽量吸除残余的乙醇，空气干燥，等到不到明显液体时，立即加入50～100μl Nuclease Free Water溶解DNA，4℃或-20℃保存。注意：不可过分干燥基因组DNA沉淀，否则会极难溶解。如果发现DNA沉淀难以溶解，可以在4℃用摇床缓慢摇动过夜，以溶解DNA沉淀。

10、 A260/A280处检测DNA纯度，高纯度的DNA一般A260/A280＞1.8。

注意事项：

如果打算提取大片段的基因组DNA，应尽量避免基因组DNA的物理性剪切。例如避免剧烈振荡含有基因组DNA的样品，可以用剪掉枪头尖的枪头吸取基因组DNA的样品。

准备细胞样品时，如果细胞量过少(＜3×107)，应0.3ml含蛋白酶K的样品裂解液。

为避免高分子质量DNA被剪切，可以不采用乙醇沉淀DNA，可用透析袋替代乙醇：在100倍体积的TE buffer中至少透析2次，所用取全部时间应＞24h。

不可过分干燥基因组DNA沉淀，否则会极难溶解。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。