分离纯化完整的RNA对于分子生物学的下游实验极其重要,也是进行基因表达分析的基础。从革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌中提取RNA的方法需要蛋白酶消化和有机溶剂抽提去除蛋白质,核酸消化去除DNA。从革兰阴性菌中分离RNA需要原生质体缓冲液,其主要由Tris-HCl、EDTA、蔗糖等组成,可以重悬沉淀的菌体。
操作步骤(仅供参考):
1、 取10ml培养物,4℃ 12000g离心10min,弃上清。
2、 重悬菌体于10ml原生质体缓冲液,加入80μl 50mg/ml的溶菌酶,冰浴15min。
3、 4℃ 6000g离心5min,弃上清。
4、 沉淀重悬于0.5ml革兰阴性菌裂解缓冲液,加入DEPC处理,37℃温育5min。
5、 进行下游抽提实验。
注意事项:
如果每次的使用量很小,可以适当分装后再使用。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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