原位杂交(in situ hybridization)是根据分子生物学核酸碱基互补原理,通过探针与细胞内特定的DNA或RNA在样本上进行杂交,从而将细胞内含有某种基因信息的DNA或其表达产物mRNA变为可见反应的一种技术。放射自显影可以用来显示杂交情况,Kodak F-5定影液又称酸性坚膜定影液,主要由硫代硫酸钠、亚硫酸钠、硼酸等组成,溶解于蒸馏水或去离子水即可,用于组织切片的放射自显影时的定影。
自备材料:
1、 暗盒、X光片
2、 光学显微镜或电子显微镜
操作步骤(仅供参考):
配制Kodak F-5定影液:取加入800ml蒸馏水于1L烧杯中,加热至50℃,按上述A、B、C、D、E顺序依次加入试剂,同时充分搅拌,每加一种至完全溶剂后,再加下一种试剂。最后补水至1000ml,4℃避光保存。
曝光:X光片暗盒中4~6℃密闭曝光,曝光时间根据观察仪器不同而不同,光学显微镜一般2~6周,电子显微镜一般数月。
显影:参照显影液说明书操作。立即置于停显液或蒸馏水中水洗。
定影:置于预先加温至16~24℃的恒温Kodak F-5定影液内,定影时间要根据实验具体条件而定。
在自来水中冲洗2~5min,以充分洗去各种残留溶液和试剂。染色,封片。
注意事项:
1、 曝光、显影、定影步骤均应在严密的避光环境中进行。
2、 配制Kodak F-5定影液时应前一种试剂充分溶解后再加入后一种,否则易导致浑浊,显影效果不佳。
3、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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