原位核酸分子杂交组织(或细胞)化学技术简称原位杂交。其基本原理是两条核苷酸单链片段在适宜的条件下通过氢键结合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA双链分子的特点,把带有标记的(有放射性核素,如3H、35S、32P及荧光素、生物素、地高辛等非放射性物质)DNA或RNA片段作为核酸探针,与组织切片或细胞内待测核酸(RNA或DNA)片段进行杂交,然后可用放射自显影等方法予以显示在光镜或电镜下观察目的mRNA或DNA的存在与定位。
做核酸杂交后,需要洗脱,一般漂洗液的主要成分为SSC缓冲液。核酸杂交漂洗液(低张力)由低浓度SSC缓冲液、Trixton等组成,离子强度较低,常用于杂交后的第二次洗脱。
操作步骤(仅供参考):
1、 在脱水后的玻片上滴加100~120μl核酸预杂交液,置于放有湿盒液的湿盒中,55~58℃下预杂交2h。
2、 用52℃预热的核酸杂交漂洗液(高张力)漂洗2次,每次30min。
3、 用52℃预热的核酸杂交漂洗液(等张力)漂洗2次,每次30min。
4、 用52℃预热的核酸杂交漂洗液(低张力)漂洗2次,每次30min。
5、 检测杂交信号。
注意事项:
本品使用前切忌核酸污染。
2、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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