考马斯亮蓝染色脱色液(Commassie Blue staining destaining solution)是用于蛋白凝胶考马斯亮蓝染色后脱色的溶液。采用常规脱色方法至少脱色1h可以观察到蛋白条带,采用快速脱色方法不足30min内即可观察到蛋白条带。观察到最清晰的蛋白条带则需脱色更长时间。
常规考马斯亮蓝染色脱色液经过改良,不含甲醇,含有刺激性气味的乙酸,减少了对人体的伤害。
自备材料:
1、水平摇床或侧摆摇床
2、蒸馏水
3、20%甘油水溶液
操作步骤(仅供参考):
(一)常规染色脱色方法
1、凝胶染色后倒出染色液。染色液可以回收重复使用2~3次。
2、加入适量脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
3、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温脱色4~24h。期间更换脱色液2~4次,直至蓝色背景基本上全部被脱去,并且蛋白条带染色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1~2h后即可出现。
4、完成脱色后把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨,可以把胶保存在含20%甘油水溶液中,长期保存可以制备干胶。
(二)快速染色脱色方法
1、凝胶染色后倒出染色液。染色液可以回收重复使用2~3次。
2、加入适量脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
3、微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾,立即停止加热。
4、随后在脱色液温度较高的情况下,在摇床上摇动5~10min。此时通常可以观察到比较清楚的蛋白条带。
5、 更换新鲜的脱色液,重复步骤3和步骤4,直至蓝色背景基本上全部被脱去,蛋白条带染色效果达到预期。
6、完成脱色后把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨,可以把胶保存在含20%甘油水溶液中,长期保存可以制备干胶。
注意事项:
1、染色时,如果把凝胶和染色液一起放置在微波炉中适当加热,可以大大加快染色速度。但加热时宜尽量避免沸腾,以免出现因暴沸而导致的凝胶碎裂。
2、脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸,可以使部分染料吸附在吸水纸上,加快脱色。脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。
3、如果希望染色的背景更低,希望获得更加清晰的蛋白条带,可以加入适量的室温蒸馏水进行洗涤。通过蒸馏水洗涤可以进一步降低背景。在4℃蒸馏水中浸泡过夜可以获得背景更低,条带更清晰的条带。在次日对4℃蒸馏水浸泡过夜的已经进行了染色的凝胶再同前一天一样进行染色和洗涤可以进一步改善染色效果,获得更好的考染蛋白条带。
4、微波炉加热导致的高温会引起染色液和脱色液中的乙酸的挥发,最好能在通风橱中进行。
5、本染色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。
6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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