Western封闭液(尼龙膜)即Western Blocking Buffer主要由TBS、脱脂奶粉、BSA、Antifoam A等组成。可用于蛋白印迹中转移了蛋白样品的尼龙膜的封闭,不适用于PVDF膜或NC膜的封闭。封闭后可以减小后续的一抗或二抗和膜的非特异性结合,降低背景,增强信噪比。每张膜封闭大约需要10ml封闭液。
自备材料:
1、 TBST或Western洗涤液
2、 摇床
操作步骤(仅供参考):
蛋白印迹转膜后加入Western洗涤液,在摇床上摇动洗涤蛋白膜1~2min。
取恰当容量的容器加入Western封闭液(尼龙膜),在摇床上摇动室温封闭60min。
直接进行一抗孵育等后续操作。
注意事项:
如果对于一些背景非常高的抗体,可以4℃封闭过夜。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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