产品仅供教研使用,用于定量检测细胞培养上清、血清、血浆中 羊INS。
简介
胰岛素(INS)是一种由胰岛β细胞产生的肽类激素,它通过促进血液中的葡萄 糖被肝脏、脂肪和骨骼肌细胞吸收来调节碳水化合物、脂肪和蛋白质的代谢。 在这些组织中,吸收的葡萄糖要么通过糖化作用转化为糖原,要么通过脂肪 生成作用转化为脂肪(甘油三酯),或者在肝脏的情况下,两者都转化为糖 原。血液中高浓度的胰岛素会强烈抑制肝脏的葡萄糖生产和分泌。循环中的 胰岛素还影响各种组织中蛋白质的合成。因此,它是一种同化激素,促进血 液中的小分子转化为细胞内的大分子。血液中的低胰岛素水平具有相反的效 果,它促进广泛的分解代谢,特别是储备的身体脂肪。
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物INS,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中INS的浓度。
8. 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
抗体工作液配置 : 使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置 : 使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备 注:如待测样本中INS浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(pg/mL) |
500 |
250 |
125 |
62.5 |
31.25 |
15.63 |
7.82 |
0 |
OD值 |
2.452 |
1.663 |
1.084 |
0.703 |
0.354 |
0.25 |
0.151 |
0.07 |
校正OD值 |
2.382 |
1.593 |
1.014 |
0.633 |
0.284 |
0.18 |
0.081 |
0 |
本图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
实验步骤
6. 终止反应:待显色反应结束后,每孔加入50μL终止液,轻轻混匀,5分钟内用预热完成的酶标仪在450nm处测吸光值。
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康 羊血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。
线性关系
分别在选取的4份健康 羊血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度INS,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评估线性。
注意事项
本公司 羊ELISA试剂盒检测范围、灵敏度等实验数据,因检测样本的不同会有所调整,实际数据以随货说明书为准。