叶酸(FA)ELISA试剂盒
产品仅供教研使用
用于定量检测血清、组织等样本中的叶酸含量。
简介
叶酸属于水溶性维生素，别称维生素B9，起先在肝脏中分离出来，因其在植物绿叶中含量十分丰富，后被命名为叶酸。它是一碳单位的主要供体，是细胞DNA合成过程中的重要辅酶，参与合成氨基酸及核酸，在细胞复制分裂、组织分化等方面发挥着至关重要的作用。人类胚胎神经管闭合的时间为受孕后第21天至28天，这段时间内如果母体叶酸缺乏，胎儿神经管闭合可能会出现障碍，致使不良结局如无脑儿、脑膨出、脊柱裂等的发生。
叶酸缺乏也会导致DNA合成受到阻碍，骨髓幼红细胞合成的DNA会减少，致使细胞核成熟以及分裂缓慢，细胞分裂速度迟缓，核浆发育失衡，细胞体积增大，发生巨幼细胞贫血。低叶酸水平还可引起同型半胱氨酸升高，使动脉硬化、血栓以及高血压的发生风险增加，同型半胱氨酸可引发胎盘内皮细胞损伤，使胎儿生长受限及母体子痫前期的发生风险增加。缺少叶酸还可引发DNA低甲基化，增加发生肿瘤的危险。总之，缺乏叶酸与神经管畸形、巨幼细胞贫血、唇腭裂、肿瘤等疾病有关，孕期缺乏叶酸还可增加流产、早产的风险。
检测原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中叶酸和微孔条上预包被的偶联抗原竞争叶酸抗体，加入酶标二抗后，形成包被抗原-抗体-酶标二抗复合物。随后结合的酶催化TMB底物显色，样本吸光值与其含有的叶酸成负相关。通过标准曲线可准确定量样品中叶酸的含量。通过标准曲线计算所得值乘以样品处理的稀释倍数即为实际样品中叶酸的含量。
检测实验的局限性
试剂盒的使用期限不得超过试剂盒标签上的有效期。不要将试剂与其他批次或来源的试剂混合使用或替换使用。如果样品产生的值高于最高标准，则用测定稀释剂进一步稀释样品，并重复测定。稀释剂、操作人员、移液技术、洗涤技术、培养时间或温度以及试剂盒使用年限的任何变化都可能导致结合变化。样本采集、处理和存储的变化可能会导致样本值的差异。本试剂盒实验设计消除了不同样品中可能潜在的干扰因素的影响，但并不能涵盖所有潜在影响因素。不能排除存在其他干扰的可能性。
操作要点
为了避免交叉污染，在添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。当使用自动洗板机时，在加入洗涤缓冲液后加入30秒的浸泡期，或者在洗涤步骤之间将板旋转180度，可以提高测定精度。显色剂应保持无色，直到添加到板中。确保显色剂不受光线照射。应按照与显色剂相同的顺序将终止液添加到板中。加入终止液后，孔中形成的颜色将从蓝色变为黄色。蓝色的孔表示终止液未与溶液充分混合。
试剂盒组成及储存条件
需要的其他材料
1. 酶标仪，包含450nm测定波长，同时包含600-680nm校正波长更佳；
2. 移液器及枪头；
3. 蒸馏水或去离子水；
4. 100-1000mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机；
6. 水平轨道微孔板振荡器，能够保持500±50 rpm的速度；
7. 用于稀释标准品和样品的试管。
注意事项
1. 此试剂盒提供的终止液为稀硫酸溶液，具有一定腐蚀性，应谨慎操作。
2. 该试剂盒中的某些成分含有防腐剂，可能会引起皮肤过敏反应，应佩带口罩避免吸入薄雾。
3. 显色剂B可能会引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激，应佩带口罩避免吸入薄雾。
4. 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
试剂准备
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。
洗涤液/稀释液配制：如果洗涤液/稀释液（20×）有晶体析出，需在37℃下加热⾄晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释（例如：1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水）
标准品配制
试剂盒中取出标准品，准备7个试管，先将100 ppm标准品（100µL）按需吸取一定量用1×稀释液稀释至360 ppb（例：3.6µL的标准品母液+996.4µL的1×稀释液，制备得到1000μL的360 ppb浓度标准品），随后在5个试管中分别加入500μL的1×稀释液，在这5个单独的试管中将360 ppb标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度，共配制6个浓度的标准品，依次为：360 ppb、180 ppb、90 ppb、45 ppb、22.5 ppb、11.25 ppb、5.63 ppb，从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中，轻轻吹打混匀，以此类推进行标准品的倍比稀释（如图所示），1×稀释液用作零浓度标准品(0ppb)。
一抗工作液配制：
使用前10分钟，用1×稀释液将100×一抗工作液稀释成1×一抗工作液，根据所需用量配置。
酶标二抗工作液配制：
使用前10分钟，用1×稀释液将100×酶标二抗稀释成1×酶标抗体工作液，根据所需用量配置。
备 注：如样本中待测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况选择适当的稀释倍数 (建议：将待测样本用样品稀释液最低稀释1倍，在正式实验之前做预实验，以确定具体稀释倍数) ；标准品母液及100×酶标二抗溶液根据实验所需酶标板孔数吸取一定量配制工作液，剩余溶液应放回-20℃储存，且避免反复冻融。（若实验在1-2周内做完，标准品母液及100×酶标抗体置于2-8℃保存；若实验为长时间跨度实验，建议将标准品母液及100×酶标抗体置于-20℃保存，以保证实验结果的稳定性）
结果的计算
以浓度的对数为横坐标，OD值为纵坐标，绘出四参数逻辑函数的标准曲线。或者使用能够生成四参数逻辑（4-P）曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。
若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
示例数据
以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
|
标准品浓度(ppb)
|
360
|
180
|
90
|
45
|
22.5
|
11.25
|
5.63
|
0
|
|
校正OD值
|
0.211
|
0.428
|
0.586
|
1.016
|
1.669
|
2.217
|
2.646
|
3.033
|
本图所示标准曲线仅供示例，结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果
精密度
批内精密度：
三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估。
批内变异系数 CV%小于10%。
批间精密度
三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估。
批间变异系数 CV%小于15%。
回收率
样本回收率：80%-120%
灵敏度
经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为5.63ppb。
线性关系
校准品剂量反应曲线相关系数r值，大于等于0.9990。
交叉反应性
叶酸：100%
本酶联免疫检测试剂盒可以经济、快速地检测血清等样品中的叶酸的残留量。
021-54720761
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