产品仅供教研使用,用于定量检测细胞培养上清、血清、血浆中 人PSMa7。
简介
蛋白酶体亚基alpha 7型也称为20S蛋白酶体亚基alpha-4是由PSMa7基因编码的蛋白质,这种蛋白质是17个基本亚基之一(α亚基1-7、组成型β亚基1-7和诱导亚基,包括β1i、β2i、β5i),有助于20S蛋白酶体复合物的完整组装,真核蛋白酶体识别可降解蛋白质,包括用于蛋白质质量控制目的的受损蛋白质或用于动态生物过程的关键调节蛋白质成分,修饰的蛋白酶体免疫蛋白酶体的一个基本功能是加工I类 MHC肽,作为α环的一个组成部分,它有助于七聚体α环和底物入口门的形成,重要的是,该亚基在19S碱基和20S的组装中起关键作用,这种特殊的亚基已被证明与乙型肝炎病毒X蛋白特异性相互作用,该蛋白是一种对病毒复制至关重要的蛋白质,此外,该亚基参与调节丙型肝炎病毒内部核糖体进入位点(IRES)活性,这是病毒复制所必需的活性,这个核心α亚基还参与调节缺氧诱导因子-1α,这是一种对细胞对氧张力的反应很重要的转录因子,最近对E3连接酶Parkin相关神经 退行性变的潜在机制的研究将这种蛋白酶体亚基确定为Parkin合作伙伴,蛋 白质-蛋白质相互作用是在Parkin的C末端结构域和亚基alpha4的C末端之间开始的(系统命名法)。
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物PSMa7,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中PSMa7的浓度。
8. 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
抗体工作液配置 : 使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置 : 使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备 注:如待测样本中PSMa7浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(ng/mL) |
10 |
5 |
2.5 |
1.25 |
0.625 |
0.313 |
0.157 |
0 |
OD值 |
2.586 |
1.651 |
0.943 |
0.697 |
0.513 |
0.273 |
0.173 |
0.076 |
校正OD值 |
2.510 |
1.575 |
0.867 |
0.621 |
0.437 |
0.197 |
0.097 |
0 |
本图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
实验步骤
6. 终止反应:待显色反应结束后,每孔加入50μL终止液,轻轻混匀,5分钟内用预热完成的酶标仪在450nm处测吸光值。
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康 人血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。
线性关系
分别在选取的4份健康 人血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度PSMa7,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评估线性。
注意事项
本公司 人ELISA试剂盒检测范围、灵敏度等实验数据,因检测样本的不同会有所调整,实际数据以随货说明书为准。