产品仅供教研使用,用于定量检测细胞培养上清、血清、血浆中 马IL-2。
简介
白细胞介素2(IL-2)是一个细胞因子家族的成员,其每个成员都有一个四条α螺旋束;该家族还包括IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21。IL-2通过IL-2受体发出信号,这是一个由三条链组成的复合物,被称为α、β和γ。伽马链是所有家族成员共有的 。IL-2受体(IL-2R)α亚基与IL-2结合的亲和力低(Kd~ 10-8 M)。由于IL-2的细胞内链较短,IL-2和CD25单独相互作用不会导致信号转导,但有能力(当与β和γ亚单位结合时)将IL-2R的亲和力提高100倍。IL-2R的β和γ亚单位的异源二聚化对T细胞的信号传导至关重要。
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物IL-2,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中IL-2的浓度。
8. 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
抗体工作液配置 : 使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置 : 使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备 注:如待测样本中IL-2浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(pg/mL) |
2000 |
1000 |
500 |
250 |
125 |
62.5 |
31.25 |
0 |
OD值 |
2.474 |
1.79 |
0.944 |
0.654 |
0.522 |
0.259 |
0.179 |
0.068 |
校正OD值 |
2.406 |
1.722 |
0.876 |
0.586 |
0.454 |
0.191 |
0.111 |
0 |
本图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
实验步骤
6. 终止反应:待显色反应结束后,每孔加入50μL终止液,轻轻混匀,5分钟内用预热完成的酶标仪在450nm处测吸光值。
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康 马血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。
线性关系
分别在选取的4份健康 马血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度IL-2,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评估线性。
注意事项
本公司 马ELISA试剂盒检测范围、灵敏度等实验数据,因检测样本的不同会有所调整,实际数据以随货说明书为准。