产品仅供教研使用,用于定量检测细胞培养上清、血清、血浆中 小鼠gp130。
简介
糖蛋白130(又称gp130、IL6ST、IL6R-beta或CD130)是一种跨膜蛋白,是所有细胞因子受体类的创始成员,它构成了IL-6受体家族中I型细胞因子受体的一个亚单位,它通常被称为常见的gp130亚单位,对细胞因子参与后的信号转导很重要。与其他I型细胞因子受体一样,gp130拥有一个WSXWS氨基酸图案,以确保正确的蛋白质折叠和配体结合,它与Janus激酶相互作用,在受体与其配体相互作用后引起细胞内信号,从结构上看,gp130由五个纤连蛋白III型结构域和一个免疫球蛋白C2型(免疫球蛋白样)结构域在其细胞外部分组成,这个由3个蛋白组成的复合物然后同源二聚体形成一个六聚体复合物,可以产生下游信号。
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物gp130,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中gp130的浓度。
8. 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
抗体工作液配置 : 使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置 : 使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备 注:如待测样本中gp130浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(pg/mL) |
8000 |
4000 |
2000 |
1000 |
500 |
250 |
125 |
0 |
OD值 |
2.443 |
1.666 |
1.053 |
0.759 |
0.374 |
0.227 |
0.189 |
0.053 |
校正OD值 |
2.390 |
1.613 |
1 |
0.706 |
0.321 |
0.174 |
0.136 |
0 |
本图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
实验步骤
6. 终止反应:待显色反应结束后,每孔加入50μL终止液,轻轻混匀,5分钟内用预热完成的酶标仪在450nm处测吸光值。
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康 小鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。
线性关系
分别在选取的4份健康 小鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度gp130,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评估线性。
注意事项
本公司 小鼠ELISA试剂盒检测范围、灵敏度等实验数据,因检测样本的不同会有所调整,实际数据以随货说明书为准。