小鼠趋化因子C-X-C-基元配体16(CXCL16)ELISA试剂盒
产品仅供教研使用,用于定量检测细胞培养上清、血清、血浆中 小鼠CXCL16。
简介
CXC趋化因子配体16(CXCL16)是一种属于CXC趋化因子家族的小型细胞因子,它比其他趋化因子大(有254个氨基酸),由一个CXC趋化因子结构域、一个粘蛋白样柄、一个跨膜结构域和一个细胞质尾部组成,含有一个潜在的酪氨酸磷酸化位点,可能与SH2结合,这些是趋化因子不寻常的特征,使它可以作为细胞表面结合分子以及可溶性趋化因子表达,它由淋巴器官T细胞区的树突状细胞和脾脏红浆中的细胞产生,对CXCL16有反应的细胞包括几个T细胞亚群和自然杀伤性T(NKT)细胞,它与趋化因子受体CXCR6(又称邦佐)相互作用,它的表达被炎症细胞因子IFN-γ和TNF-α诱导。
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物CXCL16,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中CXCL16的浓度。
8. 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
抗体工作液配置 : 使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置 : 使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备 注:如待测样本中CXCL16浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(ng/mL) |
10 |
5 |
2.5 |
1.25 |
0.625 |
0.313 |
0.157 |
0 |
OD值 |
2.459 |
1.669 |
0.981 |
0.767 |
0.532 |
0.224 |
0.128 |
0.065 |
校正OD值 |
2.394 |
1.604 |
0.916 |
0.702 |
0.467 |
0.159 |
0.063 |
0 |
本图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
实验步骤
6. 终止反应:待显色反应结束后,每孔加入50μL终止液,轻轻混匀,5分钟内用预热完成的酶标仪在450nm处测吸光值。
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康 小鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。
线性关系
分别在选取的4份健康 小鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度CXCL16,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评估线性。
注意事项
本公司 小鼠ELISA试剂盒检测范围、灵敏度等实验数据,因检测样本的不同会有所调整,实际数据以随货说明书为准。