犬粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA试剂盒使用说明书-犬粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA试剂盒操作注意事项

ELISA试剂盒
犬ELISA试剂盒

犬粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA试剂盒
英文名：Canine GM-CSF ELISA KIT

种属：Canine / 犬

有效期：6个月

用途：仅供科研使用

灵敏度：7.81pg/mL

检测范围：15.625 ~ 1000pg/mL
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产品信息

犬粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA试剂盒

产品仅供教研使用，用于定量检测细胞培养上清、血清、血浆中犬GM-CSF。

简介

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF），也被称为集落刺激因子2（CSF2），是一种由巨噬细胞、T细胞、肥大细胞、自然杀伤细胞、内皮细胞和成纤维细胞分泌的单体糖蛋白，具有细胞因子的功能，它是一种白细胞生长因子。GM-CSF刺激干细胞产生粒细胞（中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞）和单核细胞。单核细胞离开血液循环并迁移到组织中，在那里它们成熟为巨噬细胞和树突状细胞。粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF），也被称为集落刺激因子2（CSF2），是一种由巨噬细胞、T细胞、肥大细胞、自然杀伤细胞、内皮细胞和成纤维细胞分泌的单体糖蛋白，具有细胞因子的功能，它是一种白细胞生长因子。GM-CSF刺激干细胞产生粒细胞（中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞）和单核细胞。单核细胞离开血液循环并迁移到组织中，在那里它们成熟为巨噬细胞和树突状细胞。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物GM-CSF，清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色后，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中GM-CSF的浓度。

操作要点及注意事项

1. 混合蛋白质溶液时，应始终避免起泡。为了避免交叉污染，在添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。此外，每种试剂应单独使用容器。

2. 确保试剂不间断地添加到板孔中。为了确保准确的结果，在孵育步骤中需要粘合好封板膜。

3. 当使用自动洗板机时，在加入洗涤缓冲液后加入30秒的浸泡期，或者在洗涤步骤之间将板旋转180度，可以提高测定精度。

显色剂应保持无色，直到添加到板中。确保显色剂不受光线照射。显色剂应从无色变为蓝色。

4. 应按照与显色剂相同的顺序将终止液添加到板中。加入终止液后，孔中形成的颜色将从蓝色变为黄色。绿色的孔表示终止液未与基质溶液充分混合。

5. 此试剂盒提供的终止液为稀硫酸溶液，具有一定腐蚀性，应谨慎操作。

6. 该试剂盒中的某些成分含有防腐剂，可能会引起皮肤过敏反应，应佩带口罩避免吸入薄雾。

7. 显色剂B可能会引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激，应佩带口罩避免吸入薄雾。

8. 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。

试剂准备工作

使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。洗涤液/稀释液配置：如果洗涤液/稀释液（20×）有晶体析出，需在37℃下加热⾄晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释（例如：1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水）

标准品配置：试剂盒中取出标准品，准备7个试管，先从20ng/mL标准品（200μL）按需吸取一定量用1×稀释液稀释至1000pg/mL（例：50μL的标准品母液+950μL的1×稀释液，制备得到1000μL的1000pg/mL浓度标准品），随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液，在这6个单独的试管中将1000pg/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度，共配制7个浓度的标准品，依次为： 1000pg/mL、500pg/mL、250pg/mL、125pg/mL、62.5pg/mL、31.25pg/mL、15.625pg/mL，从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中，轻轻吹打混匀，以此类推进行标准品的倍比稀释（如图所示），1×稀释液用作零浓度标准品(0pg/mL)。