产品仅供教研使用,用于定量检测细胞培养上清、血清、血浆中 人RANk。
简介
核因子κB受体激活因子(RANκ)又称TRANCE受体或TNFRSF11A,是肿瘤坏死因子受体(TNFR)分子亚家族的一员。它是RANK-配体(RANKL)的受体,是调节破骨细胞分化和激活的RANK/RANKL/OPG信号传导途径的一部分。它与骨重塑和修复、免疫细胞功能、淋巴结发育、热调节和乳腺发育有关。它的细胞质结构域与TRAFs 1、2、3、5和6结合,将信号传递给下游目标,如NF-κB和JNK。它在骨骼肌、胸腺、肝脏、结肠、小肠、肾上腺、破骨细胞、乳腺上皮细胞、前列腺、血管细胞和胰腺中表达。最常见的是,NF-κB的激活是由RANKL介导的,但仅RANK的过度表达就足以激活NF-κB途径。
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物RANk,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中RANk的浓度。
8. 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
抗体工作液配置 : 使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置 : 使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备 注:如待测样本中RANk浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(pg/mL) |
200 |
100 |
50 |
25 |
12.5 |
6.25 |
3.125 |
0 |
OD值 |
2.439 |
1.711 |
1.008 |
0.775 |
0.474 |
0.24 |
0.193 |
0.077 |
校正OD值 |
2.362 |
1.634 |
0.931 |
0.698 |
0.397 |
0.163 |
0.116 |
0 |
本图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
实验步骤
6. 终止反应:待显色反应结束后,每孔加入50μL终止液,轻轻混匀,5分钟内用预热完成的酶标仪在450nm处测吸光值。
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康 人血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。
线性关系
分别在选取的4份健康 人血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度RANk,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评估线性。
注意事项
本公司 人ELISA试剂盒检测范围、灵敏度等实验数据,因检测样本的不同会有所调整,实际数据以随货说明书为准。