产品仅供教研使用,用于定量检测细胞培养上清、血清、血浆中 人GHRL。
简介
饥饿素(ghrelin,GHRL)是一种由胃肠道,特别是胃的肠道内分泌细胞产生的激素,它能增加食物摄入。饥饿时,血液中的饥饿素水平在餐前最高,餐后恢复到较低水平。饥饿素可能通过增加胃肠蠕动和胃酸分泌来帮助准备食物的摄入。饥饿素激活垂体前叶和下丘脑弓状核的细胞,包括启动食欲的神经肽Y神经元。饥饿素刺激具有特定受体的大脑结构--生长激素分泌物受体1A(GHSR-1A)。GHRL基因产生的mRNA有四个外显子。产生五个产物:第一个是117个氨基酸的前ghrelin。它与promotilin同源;两者都是motilin家族的成员。它被裂解产生前ghrelin,后者被裂解产生未酰化的28氨基酸的ghrelin和酰化的C-ghrelin。
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物GHRL,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中GHRL的浓度。
8. 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
抗体工作液配置 : 使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置 : 使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备 注:如待测样本中GHRL浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(ng/mL) |
50 |
25 |
12.5 |
6.25 |
3.125 |
1.563 |
0.781 |
0 |
OD值 |
2.527 |
1.685 |
0.957 |
0.61 |
0.526 |
0.228 |
0.165 |
0.056 |
校正OD值 |
2.471 |
1.629 |
0.901 |
0.554 |
0.47 |
0.172 |
0.109 |
0 |
本图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
实验步骤
6. 终止反应:待显色反应结束后,每孔加入50μL终止液,轻轻混匀,5分钟内用预热完成的酶标仪在450nm处测吸光值。
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康 人血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。
线性关系
分别在选取的4份健康 人血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度GHRL,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评估线性。
注意事项
本公司 人ELISA试剂盒检测范围、灵敏度等实验数据,因检测样本的不同会有所调整,实际数据以随货说明书为准。