产品仅供教研使用,用于定量检测细胞培养上清、血清、血浆中 人MYLK。
简介
肌球蛋白轻链激酶也被称为MYLK或MLCK,是一种丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶,能使特定的肌球蛋白轻链,即肌球蛋白II的调节轻链磷酸化。它在肌肉的收缩机制中很重要。一旦有钙离子(Ca2+)从肌浆网或细胞外空间涌入肌肉,平滑肌纤维的收缩就可能开始。首先,钙会与钙调蛋白结合。在钙离子流入并与钙调蛋白结合后,pp60 SRC(一种蛋白激酶)导致MYLK的构象改变,激活它并导致肌球蛋白轻链在丝氨酸残基19的磷酸化增加。
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物MYLK,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中MYLK的浓度。
8. 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
抗体工作液配置 : 使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置 : 使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备 注:如待测样本中MYLK浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(ng/mL) |
50 |
25 |
12.5 |
6.25 |
3.125 |
1.563 |
0.781 |
0 |
OD值 |
2.47 |
1.677 |
0.945 |
0.686 |
0.446 |
0.231 |
0.129 |
0.066 |
校正OD值 |
2.404 |
1.611 |
0.879 |
0.62 |
0.38 |
0.165 |
0.063 |
0 |
本图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。
实验步骤
6. 终止反应:待显色反应结束后,每孔加入50μL终止液,轻轻混匀,5分钟内用预热完成的酶标仪在450nm处测吸光值。
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康 人血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。
线性关系
分别在选取的4份健康 人血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度MYLK,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评估线性。
注意事项
本公司 人ELISA试剂盒检测范围、灵敏度等实验数据,因检测样本的不同会有所调整,实际数据以随货说明书为准。