小鼠CD45分子(CD45)ELISA检测试剂盒
产品仅供教研使用,用于定量检测细胞培养上清、血清、血浆中 大鼠CD45。
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物CD45,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中CD45的浓度。
操作要点及注意事项
1. 混合蛋白质溶液时,应始终避免起泡。为了避免交叉污染,在添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。此外,每种试剂应单独使用容器。
2. 确保试剂不间断地添加到板孔中。为了确保准确的结果,在孵育步骤中需要粘合好封板膜。
3. 当使用自动洗板机时,在加入洗涤缓冲液后加入30秒的浸泡期,或者在洗涤步骤之间将板旋转180度,可以提高测定精度。
显色剂应保持无色,直到添加到板中。确保显色剂不受光线照射。显色剂应从无色变为蓝色。
4. 应按照与显色剂相同的顺序将终止液添加到板中。加入终止液后,孔中形成的颜色将从蓝色变为黄色。绿色的孔表示终止液未与基质溶液充分混合。
5. 此试剂盒提供的终止液为稀硫酸溶液,具有一定腐蚀性,应谨慎操作。
6. 该试剂盒中的某些成分含有防腐剂,可能会引起皮肤过敏反应,应佩带口罩避免吸入薄雾。
7. 显色剂B可能会引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激,应佩带口罩避免吸入薄雾。
8. 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
实验步骤
所有标准品、样品建议复孔检测
1. 酶标板准备:确定试验所需要的孔数,取下未使用的酶标条放回装有干燥剂的铝箔袋。
2. 样本孵育:每孔分别加入100μL不同浓度的标准品以及预处理过的待测样品(建议样本用通用稀释液最少稀释1倍上样,目的是减少基质效应),盖上封板胶纸,37℃避光反应1 h。孵育结束后,每孔加入300μL 1×洗涤缓冲液,轻轻晃动30秒,甩干并在纸上拍干,以这种方式清洗3次。
3. 抗体孵育:每孔加入100μL生物素化抗体工作液,轻轻混匀,盖上封板胶纸,37℃避光反应1h。孵育结束后,重复步骤2中的清洗方式清洗4次。
4. 酶标孵育:每孔加入100μL 1×SA-HRP工作液,盖上封板胶纸,37℃避光反应30分钟,清洗4次,拍干。
5. 底物显色:每孔首先加入50μL显色液A,随后加入50μL显色液B,轻轻混匀,盖上封板胶纸,37℃避光反应15分钟。
6. 终止反应:待显色反应结束后,每孔加入50μL终止液,轻轻混匀,5分钟内用预热完成的酶标仪在450nm处测吸光值。
回收率
回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康 小鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。
线性关系
分别在选取的4份健康 大鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度CD45,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评估线性。
注意事项
本公司 小鼠ELISA试剂盒检测范围、灵敏度等实验数据,因检测样本的不同会有所调整,实际数据以随货说明书为准。