吖啶橙(Acridine Orange, AO)属于三环杂芳香燃料,可以标记DNA、RNA,属于异染性荧光染料。该染料具有膜通透性,能透过细胞膜,使核DNA和RNA染色。因此AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测。AO与核酸结合方式主要有:1、插入性结合,AO嵌入核酸双链的碱基对之间,这种结合方式主要为AO与DNA的结合,其荧光发射峰为530nm,激发后呈绿色荧光;2、静电吸引,带正电荷的AO与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合,这种结合方式主要为AO与RNA的结合,其荧光发射峰为640nm,激发后呈红色荧光,少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此,吖啶橙嵌合到双链DNA分子中显绿色,与DNA单链或RNA结合时发桔黄色或橙红色荧光。
吖啶橙染色液(1mg/ml)为储存液,使用时应稀释到合适浓度后使用。染色后在荧光显微镜下观察,吖啶橙可透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中,因染色质固缩或断裂为大小不等的片断,形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒;而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙染色常与EB染色合用双染,因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光,由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
自备材料:
荧光显微镜
低速离心机
PBS
细胞计数板
载玻片、盖玻片
注意事项:
Acridine Orange Stain(1mg/ml)不含破膜剂,较少单独使用。
吖啶橙染色常与EB染色合用,可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
如有低温离心机进行离心效果更佳。
操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
试剂有一定毒性,请小心操作。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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