甲基绿-派洛宁染色液(Methyl Green-Pyronin Stain,MGP)甲基绿-派洛宁染色液是一种把细胞核染成绿色或蓝绿色,把细胞浆和细胞核中的核仁染成红色或红紫色的染色液。甲基绿又称双绿SF,属于碱性染料,是具有金属光泽的绿色微结晶或粉末,分子量为608.78,分子式为C27H35Cl4N3Zn。甲基绿和细胞核中的DNA结合,从而使细胞核染成绿色或蓝绿色,派洛宁可以和细胞浆或核仁中的RNA结合,从而使细胞浆和核仁染成红色或红紫色。
甲基绿-派洛宁染色液经过改良,不含甲醇,在组织或细胞染色中对细胞核进行染色,其中的甲基绿经过提纯,更容易着色。本染色液也可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。10ml染色液可以染色20个样本。
自备材料:
1、系列乙醇、蒸馏水
2、滤纸、RNase(可选)
3、丁三醇或丙酮或正戊醇
4、4%多聚甲醛
操作步骤(仅供参考):
(一)石蜡切片染色
1、组织入Carnoy固定液或10%中性福尔马林,固定3~5h。
2、切片5μm,常规脱蜡至水,蒸馏水稍洗。
3、入Methyl Green-Pyronin Stain,室温浸染30~60min。
4、取出切片,用滤纸稍微吸干切片周围染色液。
5、用丁三醇(也可用丙酮或正戊醇)冲洗3次,每次2~3min。
6、二甲苯透明,中性树胶封固。
(二)冰冻切片染色
1、蒸馏水冲洗2min。
2、切片入Methyl Green-Pyronin Stain,室温浸染25~50min。
3、用蒸馏水冲洗2次,此时样本呈蓝色。
4、余下步骤同石蜡切片染色。
(三)细胞染色
1、用4%多聚甲醛固定10min以上。
2、蒸馏水洗涤2min。
3、换用新鲜的蒸馏水,再洗涤2min。
4、用Methyl Green-Pyronin Stain染色5~10min。
5、显微镜下观察。
(四) 荧光染色
1、如果进行免疫荧光染色,在染色后应70%乙醇洗涤2次,每次2min。
2、95%乙醇脱水2min。
3、PBS或生理盐水或TBS等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5min。
4、进行免疫荧光染色或其它荧光染料的染色。
阴性对照:
1、 取另外一张连续切片入RNase(1mg/ml),37℃恒温箱内孵育3h,蒸馏水冲洗干净。
2、 入Methyl Green-Pyronin Stain染色,余下步骤同上。RNA染色结果为阴性。
注意事项:
首次使用染色液时建议先取1~2个样品做预实验。
Methyl Green-Pyronin Stain染色可以根据染色结果和要求调整时间。
有些粘液细胞有可能被派洛宁染成红色,应注意区分。
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