甲基绿又称双绿SF,属于碱性染料,是具有金属光泽的绿色微结晶或粉末,分子量为608.78,分子式为C27H35Cl4N3Zn。
Methyl Green Stain (2%)在组织或细胞染色中对细胞核进行染色,常用于鉴定DNA,细胞核中的DNA遇甲基绿会被染成蓝绿色,亦可用于免疫荧光染色或免疫组化染色。10ml染色液可以染色20个样本。
自备材料:
1、4%多聚甲醛
2、蒸馏水
3、系列乙醇
操作步骤(仅供参考):
1、样品处理
a)对于石蜡切片:
二甲苯中脱蜡5~10min。
更换新鲜的二甲苯,再脱蜡5~10min。
无水乙醇5min。
90%乙醇2min。
70%乙醇2min。
蒸馏水2min。
b)对于冰冻切片:
蒸馏水2min。
c)对于培养细胞:
用4%多聚甲醛固定10min以上。
蒸馏水洗涤2min。
更换新鲜的蒸馏水,再洗涤2min。
2、甲基绿染色
a)对于上述处理好的样本,用Methyl Green Stain(2%)染色5~10min。
b)用蒸馏水冲洗2次,此时样本呈蓝色。
c) 95%乙醇处理5s。
d)用70%乙醇洗涤2次,直接观察或按下列组织切片操作步骤进行。
3、组织切片染色
a) 95%乙醇脱水2min。
b)更换新鲜的95%乙醇再脱水2min。
c)二甲苯透明5min。
d)二甲苯透明5min。
e)中性树胶或其它封片剂封片。
f)显微镜下观察,细胞核呈绿色或蓝绿色。
4、荧光染色
a)如果进行免疫荧光染色,在甲基绿染色液染色后,70%乙醇洗涤2次,每次2min。
b)95%乙醇脱水2min。
c)PBS或生理盐水或TBS等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5min。
d)进行免疫荧光染色或其它荧光染料的染色。
染色结果:细胞核呈绿色或蓝绿色。
注意事项:
首次使用本染液时建议先取1~2个样品做预实验。
甲基绿染色可以根据染色结果和要求调整时间。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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