精子活体染色液(伊红-苯胺黑法)可以常规检测所有精子标本的存活率,通过染料拒染法来鉴别细胞膜完整的精子,从而得出活精子的百分率。该染色液由伊红染色液、苯胺黑染色液组成,利用染料拒染原理,即相关基于损伤的细胞膜,如在非活的(死)细胞上的膜,允许非透过膜性染料可进入膜内染色;而活细胞的细胞膜能够抗拒染料进入,产生拒染现象,不着色。该染色液仅适用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
操作步骤:
1、 取洁净小试管,滴加新鲜精液1滴和伊红染色液1~2滴,混匀,放置30min。
2、 滴加苯胺黑染色液3滴,混匀,即为精液-伊红-苯胺黑染色液,放置30~60s。
3、 滴加上述精液-伊红-苯胺黑染色液1滴于载玻片上,制成涂片。
4、 晾干、镜检。油镜下观察,未着色的活精子为白色,死精子呈红色,背景呈黑色。
5、 计数200个精子,计算未着色(活精子)占200个精子的百分率。
染色结果:
活精子
不着色
死精子
红色
背景
黑色
注意事项:
精液标本一旦液化应立即检测精子存活率,最好在30min内,在任何情况下都不能超过1h,以免因脱水或温度变化导致精子失活而使染色检测结果不准。
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