Diff-Quik染色是在Wright染色基础上改良而来的一种快速染色方法,是细胞学检查中常用的染色方法之一,染液是采用世界卫生组织(WHO)推荐的快速染色方法而配制,与Wright Stain类似都是利用Romanowsky Stain技术原理改良而来的,染色结果与瑞氏染色液也极其相似,但迪夫快速染色所需的时间极短,一般90s以内即可完成染色。
精子形态的评估可以采用Diff-Quik染色液。精子形态学快速染色液(Diff-Quik法)属于WHO推荐的精子形态学染色,其染色原理是精子及细胞内不同等电点的蛋白质在相同的酸度下带不同的电荷,能选择性地结合相应的染料而着色;嗜酸性蛋白质解离的氨基带正电荷,能与带负电荷的酸性染料(如嗜酸性氧杂蒽、伊红)结合而被染成红色;嗜碱性蛋白质解离的羧基带负电荷,能与带正电荷的碱性染料(嗜碱性硫氮杂苯、亚甲蓝)结合而被染成蓝色;嗜中性蛋白质解离的带正电荷的氨基和带负电荷的羧基相等,同时结合相等的酸性染料和碱性染料而呈紫红色,但因解离电荷相等,故着色较弱。该染色液主要用于精子(细胞)形态的评估,含固定液,非常适合用于批量浸染,且背景清晰无沉渣,该染色液仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
自备材料:
载玻片
蒸馏水
显微镜
操作步骤:
制备涂片:彻底清洗2张载玻片,再用70%的乙醇洗涤,晾干。滴加5~20μl于玻片上,用第2张载玻片的边缘在清洁载玻片表面拖拉一滴精液,制成涂片。如果精子密度过高,可用生理盐水适当稀释。
入Diff-Quik Fixative或自然干燥,固定15~20s。
将玻片直立于吸水纸上以去除多余的液体。
将玻片直立于吸水纸上以去除多余的水分,并使其完全干燥,显微镜下观察。
染色结果:
精子头部顶体区
淡蓝色
精子顶体区后区
深蓝色
精子中断
可能为淡红色
精子尾部
蓝色或淡红色不等
注意事项:
Diff-Quik Fixative是精子Diff-Quik染色法的专用固定液,如需大量可用甲醇替代。
精子样本应新鲜,精子涂片应厚薄均匀,以免影响染色效果,如果精子密度过高,可采用生理盐水适当稀释。
涂片染色中请勿先去除染液或直接对涂片用力冲洗。不能先倒掉染液,以免染料沉着于涂片上。
染色液可重复使用,但不能多次重复,若有沉淀物应过滤后使用。
染色过深可用甲醇或酒精适当脱色,最好不复染。
如果染色过深或过浅,应调整染色时间或工作液浓度。
pH值对染色有一定影响,载玻片应清洁、无酸碱污染,以免影响染色效果。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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