不同的氨基酸带有不同化学性质的侧链基团,有的带有碱性侧链,有的带有酸性侧链,由此组成的蛋白质具有不同数目的碱性基团和酸性基团,这些基团会使蛋白质在不同的pH溶液中带有不同的净电荷,整个蛋白质分子带正电荷多,即为碱性蛋白(等电点偏向酸性);整个蛋白质带负电荷多,即为酸性蛋白质(等电点偏向酸性)。
酸性蛋白染色液(细胞专用)是利用酸性蛋白质与带有正电荷的酸性染料固绿结合进行染色,细胞中含量最为丰富的酸性蛋白主要存在于细胞质和核仁中,因此染色后细胞质和核仁大部分被染成绿色。该染色液仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
自备材料:
玻片
70%乙醇
水浴锅
显微镜
操作步骤:
1、 取新鲜血液1滴滴于载玻片一端,推片,室温晾干。
2、 涂片浸入70%乙醇中固定5min,室温晾干。
3、 (可选)涂片浸入酸性分化液中,60℃水浴30min。
4、 流水充分水洗,滤纸吸去残留水分。
5、 涂片浸入酸性固绿染色液染色5~15min。
6、 流水冲洗,室温晾干。
7、 直接镜检或滴加1滴中性树胶,加盖盖玻片进行封片观察。
染色结果:
细胞质、核仁
绿色
细胞核大部分区域
不着色
注意事项:
血液涂片或骨髓涂片应厚薄均匀,以免影响染色效果。
血细胞涂片染色要求新鲜全血或EDTA抗凝血。
酸性分化液孵育后,冲洗应彻底,否则会干扰固绿的染色。
染色过深可用甲醇或酒精适当脱色,最好不复染。
pH值对染色有一定影响,载玻片应清洁、无酸碱污染,以免影响染色效果。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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