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肝肌糖原含量检测试剂盒

测定意义
糖原是由葡萄糖单位构成的高分子多糖，是糖的主要的储存形式之一，主要贮存在肝和肌肉中作为备用能量，分别称为肝糖原和肌糖原。肝糖原可调节血糖浓度，当血糖升高时可在肝脏合成糖原，血糖降低时，肝糖原则分解为葡萄糖以补充血糖。因此，肝糖原对维持血糖的相对平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的储存形式,在剧烈运动消耗大量血糖时，肌糖原不能直接分解成血糖，必须先分解产生乳酸,随血液循环到肝脏,通过糖异生转变为肝糖原或葡萄糖。
测定原理
蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原，在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、浓硫酸（不允许快递）和蒸馏水。
测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至620nm，蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至95℃。
3、试剂二工作液的配制：在试剂二中倒入6mL蒸馏水，缓慢倒入24mL浓硫酸，充分溶解混匀后使用；用不完的试剂4℃保存一周；
4、加样表（在EP管中反应）：

试剂（μL）

空白管

标准管

测定管

待测样本

-

-

60

试剂一

-

60

-

蒸馏水

60

-

-

试剂二工作液

240

240

240

混匀，置95℃水浴10min（盖紧，防止水分散失），冷却，取200μL转移至微量石英比色皿或96孔板中，于620nm波长处，分别读取空白管、标准管和测定管吸光度，分别记为A1、A2和A3。

预实验的意义
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测，以免造成试剂盒和样本的浪费（比如低表达处理的样本）；
2、熟悉生化试剂盒的操作流程，尤其是初次使用生化试剂盒测定；
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适；
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题，以便于及时作出调整；
5、通过3 - 5组预实验，判断试剂盒对于样本的最佳适应稀释浓度范围，指导实验样本稀释比例。
注意
1、空白管和标准管只要测一次。
2、如果A3-A1大于2，需要将样本用蒸馏水稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。如果A3-A1小于0.3，则需要提高样品浓度。

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