还原型谷胱甘肽含量(GSHY)活性试剂盒微量法/48样
测定意义
谷胱甘肽(Glutathione)是一种生物体内广泛存在的含硫醇三肽化合物,参与多种重要的生理过程,可保护细胞免遭氧化损伤,解除药物代谢产物的毒性。谷胱甘肽在细胞中主要以还原型谷胱甘肽(ReducedGlutathione,GSH)和氧化型谷胱甘肽(OxidiedGlutathione,GSSG)两种形式存在。
测定原理
GSH可以与单氯二胺反应生成荧光物质,所测荧光值代入标准曲线可计算GSH含量。
需自备的仪器和用品
低温离心机、可调节移液器、和蒸馏水、pH试纸、荧光酶标仪(激发波长390nm,发射波长490nm)、恒温箱。
试剂组成和配制
生理盐水:液体60ml×1瓶,4℃保存。
酸性提取液:液体10ml×1瓶,4℃保存。
碱性提取液:液体10ml×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体60ml×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体×2支,-20℃避光保存。每支临用前加入1.2mL蒸馏水混匀。未使用完的试剂二可-20°C避光保存7天。
试剂三:粉剂×2支,-20℃避光保存。每支临用前加入1.2mL蒸馏水混匀。未使用完的试剂三可-20°C避光保存7天。
试剂四:液体×1支,-20℃避光保存。
标准品:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。
黑色96孔酶标板×1
预实验的意义
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测,以免造成试剂盒和样本的浪费(比如低表达处理的样本);
2、熟悉生化试剂盒的操作流程,尤其是初次使用生化试剂盒测定;
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适;
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题,以便于及时作出调整;
5、通过3-5组预实验,判断试剂盒对于样本的适应稀释浓度范围,指导实验样本稀释比例。
注意
正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定。