甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团,从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝还含有两个助色团,能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色,可染细胞核使之呈蓝色。另外,肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质,遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色,临床上经常用于肥大细胞染色。Leagene软骨染色液(甲苯胺蓝法)呈强碱性,更利于软骨组织的着色。
操作步骤(仅供参考):
1、 常规脱钙,包埋、固定。
2、 石蜡切片入二甲苯2次,每次15min。
3、 系列乙醇各1min,自来水洗2min。
4、 入软骨染色液,浸染15~20min。根据不同组织,染色时间不完全相同。
5、 自来水洗2min,滤纸吸干水分。
6、 丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。
7、 逐级乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
染色结果:软骨、成骨细胞呈紫红色;背景呈淡蓝色。
注意事项:
针对于较难着色组织的染色,浸染的时间应相应延长。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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