软骨组织由软骨细胞和软骨基质组成,软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。软骨染色方法有很多种,例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O法等。
改良番红O-固绿软骨染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色,嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而呈绿色或蓝色,与呈现红色的软骨对比鲜明,从而将软骨组织与骨组织区分开。番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料,其显示软骨是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团(硫酸软骨素或硫酸角质素)结合。番红O着色与阴离子的浓度近似成正比关系,间接反映基质中蛋白多糖的含量和分布。当软骨受到损伤时,软骨中的糖蛋白会释放出来,使基质成分分布不均匀,从而导致番红O淡染或不着色。通过图像分析软件可对番红O染色的软骨基质进行定量分析,固绿与胶原纤维结合,不宜褪色,番红O-固绿染色的分化很关键,分化过度易导致切片不着色,分化不足易导致切片着色过深。
自备材料:
1、10%福尔马林固定液
2、脱钙液
3、蒸馏水
4、系列乙醇
操作步骤(仅供参考):
1、 标本的处理:10%福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。
2、 常规脱蜡至水。
3、 入新鲜配制的Weigert染液染色3~5min。
4、 酸性乙醇分化液分化15s。
5、 蒸馏水洗1min。
6、 入固绿染色液内浸染1.5~3min,蒸馏水洗1min。
7、 入Safranin O stain内浸染2~5min,蒸馏水洗1min。
8、 用乙酸溶液洗涤切片1~2min,以便去除残留的固绿,蒸馏水洗1min。
9、 分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。
10、二甲苯透明,光学树脂封固。
注意事项:
需要显示细胞核时,尽量采用铁苏木素染色,其着色力强色调浓,一般的苏木素着色力不强。
Weigert染液不可预先配制后放置,配制好后一般24h后失去染色力。
切片在Safranin O stain中染色不宜过长,否则易导致背景的深红色不易分化掉。
切片分化时间应恰当,以背景呈绿色为宜。
Safranin O stain染色后,不宜在低浓度乙醇脱水,否则易褪色。
95%乙醇脱水时间不宜过长。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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