肌纤维(Muscle fiber)属于肌组织成分,由肌细胞组成。根据形态和功能特点,肌纤维可以分为平滑肌(又称横纹肌)、骨骼肌、心肌。肌纤维染色的方法有很多种,如丽春红法、苯胺蓝法、钨磷钨酸苏木素法等。最初发明磷钨酸苏木素染色液时,Mallory的PTAH方法中有多种钨磷酸苏木素方法,1900年左右Mallory将磷钨酸水溶液和苏木素染液联用,发现该法对于肌纤维染色较好,现在广泛使用的即为Mallory磷钨酸苏木素染色液(PTAH自然氧化法)。苏木素可用PTAH化学氧化法,但有效期较短且染色力易下降。尽管自然氧化耗费时间,但制得的苏木素可用2年以上,染色力也不易丢失,是较为理想的染色液。适用于CNS、一般组织结构以及所有标准固定液固定的组织。染色时间依配制方法、所用固定液和所显示的组织结构而异。
Mallory PTAH染色液(自然氧化法)又称Mallory磷钨酸苏木素染色液,为自然成熟的染液,染色力较好,保存时间长。多用于显示横纹肌的横纹,临床上应用该法对横纹肌肉瘤进行诊断。横纹肌肉瘤的组织学形态变化多样,与未分化的间胚叶肿瘤很难鉴别。采用磷钨酸苏木素染色后,如果在瘤细胞胞质内发现蓝色横纹,则可以证明该肿瘤是呈横纹肌分化。该染色液也可以对炎症渗出的纤维素、DIC的毛细血管中纤维素以及神经病理等方面进行染色。
自备材料:
1、10%福尔马林固定液
2、酸化高锰酸钾溶液
3、草酸溶液
4、蒸馏水
5、系列乙醇
6、光学显微镜
操作步骤(仅供参考):
组织固定于10%福尔马林固定液中,常规脱水包埋。
石蜡切片厚4μm,常规脱蜡至水。
入酸化高锰酸钾氧化5min。
稍水洗。
入草酸溶液漂白1~2min。
自来水冲洗2min,用蒸馏水洗1次。
入Mallory PTAH染色液(自然氧化法)浸染(加盖)24~48h。
取出切片,直接用95%的乙醇迅速洗去多余染液。
常规脱水透明,中性树胶封固。
注意事项:
在染色时若显示横纹的蓝色不够或横纹呈鲜红色,说明氧化时间不足或者可能是已过度氧化,需要重新换染液或配制新液。
Mallory PTAH染色液染色后不要水洗,在95%乙醇洗时也要迅速,因为水洗或乙醇洗的时间稍长,都可以洗脱磷钨酸苏木素所着染的颜色。
Mallory磷钨酸苏木素为进行性染色,不要过染,在染色24小时后,可取出在显微镜下观察着色程度。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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