胶原纤维(Collagen Fiber)是结缔组织中分布最广含量最多的一种纤维,广泛分布于各种脏器,其中皮肤、巩膜、肌腱最丰富。Van Gieson胶原纤维染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关。分子的大小由分子量来体现,小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织,而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。PA分子量小,丽春红和复红次之,淡绿分子量最大。VG染色后,肌纤维呈黄色,胶原纤维呈红色。
改良Van Gieson染色液采用天青石蓝和Mayer苏木素染细胞核,使染色效果更好,保存时间液较长。丽春红染色采用丽春红S,不易褪色。常用于区分胶原纤维和肌纤维,可区分是胶原纤维源性肿瘤还是肌源性肿瘤,观察组织或器官的损伤、修复与纤维化程度。
自备材料:
1、10%福尔马林固定液
2、蒸馏水
3、系列乙醇
操作步骤(仅供参考):
组织固定于10%福尔马林固定液中,常规脱水包埋。
切片厚4~5μm,常规脱蜡至水。
VG天青石蓝染色液滴染2~3min。
稍水洗。
Mayer苏木素染色液滴染2~3min。
稍水洗。
酸性乙醇分化液分化1~2s。
流水冲洗10min。
用配制好的改良VG染液滴染1~2min。
10、急速用水洗一下,即用95%乙醇快速分化脱水。
11、无水乙醇脱水3次,每次5~10s。
12、二甲苯透明3次,每次1~2min。中性树胶封固。
注意事项:
酸性乙醇分化液常规是1~2s,在分化完毕和流水冲洗后,应在显微镜下作观察。如细胞核染色过深,可再分化0.5~1s。如过淡,可再染VG天青石蓝液和Mayer苏木精液1次,然后再经酸性乙醇分化。
改良VG染液分为D1、D2,临用时按所需要的比例(1:9)混合,如染胶原含量少的组织,可按1:7混合。
经改良VG染色后,水洗或95%的乙醇洗时都要迅速,避免把丽春红S和PA洗掉。
改良VG液染色后,可不经水洗,直接滴入95%的乙醇分化,然后经无水乙醇迅速脱水,这样两者的色泽较鲜丽。但有时会出现分化不均匀,故可急速用水洗一下后再用95%的乙醇分化。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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