酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的溶酶体内,所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的适宜pH为4.5~5.5。存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase,TRAP)均在细胞滤泡中,并不是释放入血液。血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞,因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液以萘酚AS-BI为底物,在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚,萘酚与重氮盐偶联生成有色产物,定位于细胞质中,若细胞内的ACP有抗酒石酸的活性,则呈阳性反应。该染色液可用于新鲜血涂片、细胞涂片,亦可用于冰冻切片、石蜡切片。
自备材料:
1、 蒸馏水、恒温箱
2、 载玻片、推玻片
3、 光学显微镜
临床意义:
1、 毛细胞白血病的毛细胞ACP染色呈强阳性或中度阳性,且不被酒石酸抑制,其他细胞均呈阴性或极弱阳性。
2、 急性白血病幼单核细胞ACP染色呈阳性,原淋巴细胞呈弱阳性,原粒细胞对ACP反应不一。
3、 T淋巴细胞ACP染色呈阳性,颗粒粗大、分布密集。B淋巴细胞呈阴性或颗粒细小的弱阳性。
4、 戈谢细胞呈强阳性,尼曼-皮克细胞呈阴性或弱阳性。
注意事项:
TRAP孵育液易失效,本法宜用皮肤穿刺血涂片,晾干后应及时染色
对冰冻切片染色时,应减少切片在室温暴露的时间。
样本需新鲜,取材后应立即处理,否则会影响酶的活性。
组织固定需在4℃冰箱进行,时间不宜超过24h,否则酶活性会减弱或消失。
组织在石蜡包埋时,温度不宜高于56℃。应使用熔点为52~54℃的石蜡进行浸蜡,浸蜡时间要短,否则酶活性会减弱或消失。
不纯的二甲苯会分解黑色沉淀,宜选用AR级以上的二甲苯。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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