酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的溶酶体内,所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的适宜pH为4.5~5.5。
酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)以萘酚AS-BI为底物,在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚,萘酚与重氮盐偶联生成有色产物,定位于细胞质中。对某些酸性磷酸酶来讲,Cu2+、酒石酸根离子和四氯化碳以及醛类也都是抑制剂,Mn2+为该酶的激活剂。多用于新鲜血涂片、细胞涂片、冰冻切片等,亦可用于石蜡切片。
自备材料:
1、 蒸馏水、恒温箱
2、 载玻片、推玻片
3、 光学显微镜
注意事项:
ACP孵育液易失效,本法宜用皮肤穿刺血涂片,晾干后应及时染色
对冰冻切片染色时,应减少切片在室温暴露的时间。
样本需新鲜,取材后应立即处理,否则会影响酶的活性。
组织固定需在4℃冰箱进行,时间不宜超过24h,否则酶活性会减弱或消失。
组织在石蜡包埋时,温度不宜高于56℃。应使用熔点为52~54℃的石蜡进行浸蜡,浸蜡时间要短,否则酶活性会减弱或消失。
不纯的二甲苯会分解黑色沉淀,宜选用AR级以上的二甲苯。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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