在组织切片过程中,一些组织内含有骨质或钙化灶时,含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同,较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后,再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多,脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂,对组织结构影响最小,可以较好的保存组织的某些酶类,经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢,一般脱需要数周至数月。
福尔马林-EDTA脱钙液主要由福尔马林、EDTA等组成,pH值约为7.2~7.4,相对于常规EDTA脱钙液,该试剂脱钙后对组织结构损害小,但脱钙速度更慢。其优点是:①经EDTA脱钙的组织染色结果好;②对组织的结构损害比常规EDTA脱钙液更小。其缺点是:①脱钙速度很慢,不适合常规标本脱钙使用;②脱钙后组织会稍微变硬;③不宜用化学方法确定脱钙终点。
自备材料:
1、 PBS
2、 蒸馏水
3、 加热装置或微波炉
注意事项:
1、 厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可。
2、 适当加温能加快脱钙的速度,一般不应超过37~40℃,温度过高容易使骨组织造成松散解体,尤其不可大于60℃。
3、 脱钙应彻底,防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间,以免脱钙过长引起组织损害。
4、 脱钙用具避免使用金属容器,尽量使用玻璃容器。
5、 骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行,不应先脱钙后固定,以便减少组织的损伤程度。
6、 每隔一段时间检测一次脱钙程度,脱钙过度会增加组织的损伤程度,影响染色结果。
7、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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