在组织切片过程中,一些组织内含有骨质或钙化灶时,含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同,较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后,再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多,脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。在有机酸中,甲酸、乙酸比较适合于骨髓组织脱钙。甲酸脱钙液是一种使用范围广泛的脱钙剂,但是该法脱钙速度太慢,不适合密皮质骨的脱钙。
甲酸脱钙液主要由甲酸、福尔马林等组成。其优点:①对细胞核染色结果较好;②兼具脱钙和组织固定的作用;③适用于小块组织和牙齿的脱钙。其缺点:①脱钙速度比较慢,不适合常规标本脱钙使用;②不适合密皮质骨脱钙使用;③脱钙后需要硫酸钠溶液进行碱处理。
自备材料:
1、 PBS
2、 蒸馏水
3、 5%硫酸钠溶液
注意事项:
1、 厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙3~10天即可。
2、 脱钙应彻底,防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间,以免脱钙过长引起组织损害。
3、 骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行,不应先脱钙后固定,以便减少组织的损伤程度。
4、 每隔一段时间检测一次脱钙程度,脱钙过度会增加组织的损伤程度,影响染色结果。
5、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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