胆碱酯酶(cholinesterase)属于特异性酯酶,可分为两大类。一类是乙酰胆碱酯酶(Acetyl cholinesterase,AChE)又称为真性胆碱酯酶,能水解乙酰胆碱,起到生理的调节作用;另一类为胆碱酯酶,又称假性胆碱酯酶(Pseudo cholinesterase,PsChE),能水解胆碱的酯而不能水解乙酰胆碱酯。乙酰胆碱酯酶主要存在于神经元的胞质内、神经与肌肉接头处即所谓运动终板处;PsChE主要存在于血浆、胰腺、唾液腺内,生理功能尚不明确。显示乙酰胆碱酯酶的方法有Koell法、Snell和Garrett法、Karnovsky和Roots法等。
乙酰胆碱酯酶染色液(铅铜硫胆碱法)染色原理是乙酰胆碱酯酶水解碘化乙酰硫代胆碱,释放乙酸和硫代胆碱,磷酸盐与铅离子形成磷酸铅沉淀,再被S2+置换,形成硫化铅沉淀。其优点是操作简便、酯酶的扩散较少,其缺点是对底物对组织的渗透性较差,有可能出现假阳性。
自备材料:
10%甲醛钙固定液
恒温培养箱
光学显微镜
阴性对照(可选):
取配制好的AChE孵育液,按AChE孵育液: AChE-ChE抑制剂=50:1充分混合。取相同切片入含AChE-ChE抑制剂的AChE孵育液中,其余同上,呈阴性反应。
注意事项:
本染色液适用于冰冻切片,同时应减少切片在室温暴露的时间。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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