三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphatase,ATPase)是一种水解酶,是催化ATP合成的一种酶。三磷酸腺苷酶根据所用激活剂、抑制剂以及酶定位的不同分为膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、线粒体三磷酸腺苷酶等。ATPase能水解三磷酸腺苷为磷酸腺苷和磷酸,此酶只作用于磷酸与磷酸之间的高能键,因而释放大量能量。其催化反应如下:
A-P-P-P + H2O→A-P-P + H3PO4 +能量
ATPase染色(钙钴法)原理在于三磷酸腺苷酶水解三磷酸腺苷为二磷腺苷和磷酸,磷酸根与钙离子结合为磷酸钙沉淀,再依次被置换为磷酸钴和硫化钴,最终产物为黑色硫化钴沉淀。
自备材料:
1、 蒸馏水
2、 恒温箱
阴性对照(可选):
1、取对照切片,用试剂(F)-ATPase对照液进行孵育,并与用ATPase孵育液孵育的切片进行比较。两者反应相同部位可能有非特异性磷酸(单酯)酶存在,两者不同部位才是ATP酶活性所在。
2、将切片入80℃蒸馏水10min,再与其他组织切片同时孵育,结果应为阴性。
注意事项:
1、 ALP孵育液、ALP硫化液易失效,最好分成小分储存,一经开启立即使用。
2、 ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味,应小心操作。
3、 对冰冻切片染色时,应减少切片在室温暴露的时间。
|
共有(72)人参考评价
仅对购买过该产品的用户开放!
{comment_time|今天}
{content|默认评论}
{comment_time|今天}
{content|默认好评}
{comment_time|今天}
{content|默认中评}
{comment_time|今天}
{content|默认差评}