乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)能把乳酸氧化为丙酮酸,该酶存在于能进行糖酵解的细胞中,在细胞受伤死亡时酶被释放出来。LDH有五种同工酶,LDH1~5分别存在于不同组织中。含此酶活性高的组织为肝脏、骨骼肌,其正常红细胞的LDH活性比血清高约100倍。LDH1为H型(心型),与氧代谢有关;LDH5为M型(肌型),与厌氧代谢有关。
乳酸脱氢酶染色液(M型,四唑盐法)以乳酸为底物,在酶作用下脱氢,硝基蓝四唑(nitro BT)为受氢体,接受氢后被还原为甲噁,呈蓝紫色,用以代表M型乳酸脱氢酶(心型,即LDH5)的活性。LDH5孵育液中含有特殊的中间递氢体,使定位更准确,染色更清晰。
自备材料:
1、 蒸馏水
2、 恒温箱或水浴锅
操作步骤(仅供参考):
冰冻切片,厚6μm,无需固定。
切片人LDH5孵育液中,置于37℃温箱,浸染约5~30min。
蒸馏水冲洗。
甘油明胶封固。
阴性对照(可选):
相同切片入LDH5对照液中,置于37℃温箱,浸染约5~30min,作为对照。其余步骤同正常步骤,结果为阴性。
注意事项:
本染色液适用于冰冻切片。
对冰冻切片染色时,应减少切片在室温暴露的时间。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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